苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白Cry1D新基因的克隆与特性
时间： 2019-11-18 点击次数：次 作者：
余宗兰，贺利业，孙宏伟，李平，郑爱萍
中国生物防治学报，2019，35（2）：288-294
http://d.wanfangdata.com.cn/periodical/zgswfz201902018
摘要
为扩充鳞翅目害虫杀虫基因资源,本研究从苏云金芽胞杆菌BN23-5中克隆得到一个新的cry基因,并对其进行鉴定和分析.该基因为一个完整的cry1D基因,全长3501bp,编码1166个氨基酸残基.该氨基酸序列是一个新的Cry氨基酸序列,与Cry1Db1的同源性最高,为86％,命名为Cry1Dd1(登录号为KJ728844).将该基因插入穿梭表达载体pSTK中,转入BT无晶体突变株-HD73中进行表达.结果表明,cry1Dd1基因能在BT无晶体突变株中表达,并形成菱形伴孢晶体.SDS-PAGE验证其分子量为132.2 kD,与预测的大小相符.生物活性测定表明,Cry1Dd1晶体蛋白对小菜蛾的幼虫具有杀虫活性,LC50为13.1μg/mL;能明显抑制甜菜夜蛾幼虫的生长;但对棉铃虫幼虫没有杀虫活性.对cry1Dd1基因序列进行分析,cry1Dd1包含8个block保守区域,这和目前其他的cry基因相似;Cry1Dd1蛋白的活性区域为N端的37～593位氨基酸残基.